Protocolos:

Protocolos para colocar trampas de Malaise y manipular las muestras

Protocolos para Culicidae (Darlene Judd)

Protocolos para Ceratopogonidae (Art Borkent)

Protocolos para Dolichopodidae (Daniel Bickel)

Protocolos para Asilidae (Eric Fisher)

Protocolos para Sarcophagidae (Thomas Pape)

Protocolo para separar Acalyptratae (Stephen Marshall y Matthias Buck)



Protocolos para Culicidae (Luis Guillermo Chaverri y Darlene Judd)

Recolección:
Las Áreas de Conservación son visitadas dos veces al año, una visita en época seca y la otra en época lluviosa, con el propósito de determinar diferencias estacionales en la composición de especies. La información detallada del ambiente de las formas inmaduras (larva/pupa) es recopilada para un contar con un mayor conocimiento de la biología de los zancudos. Los adultos se recolectan mediante red entomológica y con trampas ABC que utilicen fuentes de luz o emisiones de CO2. Las hembras que se alimentan de sangre en el campo son recolectadas para obtener huevos y progenies. Tales hembras se colocan en frascos con una capa de algodón húmedo en el fondo, y un trozo de algodón humedecido con agua de azúcar en la tapa. Los huevos que deposite la hembra sobre el algodón son transferidos con un pincel a una taza con agua. Se usa un poco de alimento para peces (Tetra Min baby fish food) para alimentar a las larvas y permitir su desarrollo. Una muestra de los huevos se conserva en alcohol de 75%. Las larvas son recolectadas en huecos de troncos, agua contenida en recipientes artificiales, lagunas, charcos, bromelias, inflorescencias de heliconias, pecíolos de aráceas, etc. Para su recolección se emplean redes acuáticas, pipetas Pasteur, mangueras para succión, cucharones, etc. El material recolectado es transportado al laboratorio en bolsas plásticas Whirl-Pak o frascos limpios debidamente rotulados.

Crianza de larvas:
Para efectos de identificación, es importante que el material criado, larvas y pupas, sea montado en láminas fijas. Se asociarán las fases larvales y pupales con el adulto para elaborar claves taxonómicas de esos tres estadios. En el laboratorio las larvas son separadas individualmente o en grupos de 2 a 3, y colocadas en tazas con agua limpia para permitir la pupación. Algunas larvas son preservadas en alcohol de 75% para su posterior montaje. Tanto las exuvias larvales, las pupales y los adultos correspondientes presentan el mismo código de recolección y crianza. Las exuvias son mantenidas en frascos de ¼ de dram de capacidad con alcohol al 75%.

Montaje de especímenes:
Los adultos son montados en el sistema de triángulos en posición horizontal y con las patas dirigidas hacia el alfiler. Preferiblemente, las exuvias deben ser montadas lo antes posible. Si este proceso no se lleva a cabo con prontitud, el montaje se dificultará. Las exuvias larvales y pupales se colocan en alcohol isopropílico por 5 minutos, y luego se montan en medio de montaje Euparal. Cuando se montan las exuvias larvales, los pelos torácicos y abdominales se deben extender hacia los lados del cuerpo y el sifón debe quedar ligeramente separado del segmento anal. Para el montaje de larvas se debe diseccionar la cabeza y eliminar los tejidos en KOH por 5 minutos, o en ácido láctico de 10 a 15 minutos. El abdomen se disecciona en el séptimo segmento. De cada morfotipo se efectúa un montaje de un macho y una hembra en lámina fija. A tales adultos se les diseccionan las antenas, la cabeza, las alas, las patas, y la genitalia. Tales estructuras se montan en la misma lámina y bajo un cubreobjetos de 10 mm. de diámetro. Las láminas se mantienen en una estufa a 45 ºC por 3 a 4 semanas para su secado.


 


Colectando Larvas

 

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