Los adultos pululan alrededor de frutos, legumbres, flores y otras plantas u hongos en descomposición. En este medio cortejan, se aparean, ponen huevos y las larvas se alimentan de bacterias y levaduras. Otros hábitos larvales incluyen alimentación en la gruesa capa de hojas y otros materiales húmedos del piso del bosque (especies del género Diathoneura ), en flores vivas o muertas (especies de los géneros Zapriothrica, Zygothrica y Drosophila ) en savia fresca o corteza en descomposición (especies de los géneros Chymomyza y Neotanygastrella ) y en porciones de cactos en descomposición (especies del género Drosófila ). Las larvas de algunas especies de los géneros Rhinoleucophenga, Cladochaeta y Pseudiastata son depredadoras de homópteros sésiles, tales como escamas y cochinillas. Muchas especies de los géneros Zygothrica e Hirtodrosophila se les encuentra en grandes agregaciones sobre hongos blancos frescos, que se desarrollan sobre troncos podridos en el piso de los bosques. La mejor manera de colectar los drosofílidos es mediante la cría de especímenes en sus medios de reproducción o capturándolos en el campo por medio de una red de mano fina. Los especímenes se montan para estudio científico en triángulos de papel o en alfileres minutos. Hoy día algunas especies del género Drosophila son reproducidos en laboratorios para trabajos en genética y otras investigaciones.